Khowe, Benino pietuose, buvo atlikta keletas namelių pagrįstų bandomųjų bandymų, siekiant įvertinti naujų ir lauke išbandytų naujos kartos tinklų nuo uodų biologinį veiksmingumą prieš piretrinui atsparius maliarijos pernešėjus. Lauke sendinti tinklai iš namų ūkių buvo išimti po 12, 24 ir 36 mėnesių. Kiekvieno bandymo metu buvo ištirtos iš ištisų ITN iškirptų tinklo dalių cheminė sudėtis ir jautrumo biologiniai tyrimai, siekiant įvertinti atsparumo insekticidams pokyčius Khowe vektorių populiacijoje.
Interceptor® G2 pranoko kitus ITN, patvirtindamas piretroidinių ir chlorfenapiro tinklų pranašumą prieš kitų tipų tinklus. Tarp naujų produktų visi naujos kartos ITN parodė geresnį biologinį efektyvumą nei Interceptor®; tačiau šio pagerėjimo dydis sumažėjo po lauko senėjimo dėl trumpesnio ne piretroidinių junginių patvarumo. Šie rezultatai rodo, kad reikia pagerinti naujos kartos ITN atsparumą insekticidams.
Insekticidas- apdoroti tinkleliai nuo uodų (ITN) per pastaruosius 20 metų atliko svarbų vaidmenį mažinant sergamumą maliarija ir mirtingumą nuo maliarija. Nuo 2004 m. visame pasaulyje buvo išplatinta daugiau nei 3 milijardai ITN, o modeliavimo tyrimai rodo, kad 2000–2015 m. Afrikoje į pietus nuo Sacharos 68 % maliarijos atvejų buvo išvengta. Deja, maliarijos pernešėjų populiacijų atsparumas piretroidams (standartinė ITN naudojamų insekticidų klasė) labai išaugo, o tai kelia grėsmę šios esminės intervencijos veiksmingumui. Tuo pačiu metu maliarijos kontrolės pažanga sulėtėjo visame pasaulyje, o daugelyje šalių, kuriose yra didelė našta, maliarijos atvejų padaugėjo nuo 2015 m. Šios tendencijos paskatino kurti naujos kartos novatoriškus ITN produktus, skirtus kovoti su atsparumo piretroidams grėsme ir padėti sumažinti šią naštą bei pasiekti ambicingų pasaulinių tikslų.
Šiuo metu rinkoje yra trys naujos kartos ITN, kurių kiekvienas jungia piretroidą su kitu insekticidu arba sinergikliu, galinčiu įveikti maliarijos pernešėjų atsparumą piretroidams. Pastaraisiais metais buvo atlikta nemažai klasterio atsitiktinių imčių kontroliuojamų tyrimų (RCT), siekiant įvertinti šių tinklų epidemiologinį veiksmingumą, palyginti su standartiniais tik piretroidiniais tinklais, ir pateikti būtinų įrodymų, patvirtinančių Pasaulio sveikatos organizacijos (PSO) rekomendacijas. PSO pirmieji rekomendavo lovų tinklelius, kuriuose piretroidai derinami su piperonilo butoksidu (PBO) – sinergikliu, kuris didina piretroidų veiksmingumą slopindamas uodų detoksikacijos fermentus, po to, kai du produktai (Olyset® Plus ir PermaNet® 3.0) įrodė didesnį epidemiologinį poveikį, palyginti su atsitiktinai tirtų piretroidų tinkleliu. Uganda. Tačiau reikia daugiau duomenų, kad būtų galima nustatyti piretroidų-PBO lovų tinklų vertę visuomenės sveikatai Vakarų Afrikoje, kur didelis atsparumas piretroidams gali sumažinti jų naudą, palyginti su tik piretroidais.
ITN insekticidinis išlikimas paprastai vertinamas periodiškai renkant tinklus iš bendruomenių ir juos išbandant laboratoriniais biologiniais tyrimais, naudojant vabzdžių išvestas uodų padermes. Nors šie tyrimai yra naudingi apibūdinant insekticidų biologinį prieinamumą ir veiksmingumą tinklelių paviršiuje laikui bėgant, jie suteikia ribotos informacijos apie skirtingų tipų naujos kartos tinklelių lyginamąjį efektyvumą, nes naudojami metodai ir uodų padermės turi būti pritaikyti prie juose esančių insekticidų veikimo būdo. Eksperimentinis namelio testas yra alternatyvus metodas, kurį galima naudoti norint palyginti insekticidais apdorotų tinklų veiksmingumą atliekant patvarumo tyrimus sąlygomis, kurios imituoja natūralią laukinių uodų šeimininkų ir namų apyvokos tinklų sąveiką naudojimo metu. Iš tiesų, naujausi modeliavimo tyrimai, kuriuose epidemiologiniams duomenims naudojami entomologiniai pakaitalai, parodė, kad šiuose tyrimuose išmatuotas uodų mirtingumas ir maitinimosi rodikliai gali būti naudojami prognozuojant ITN poveikį maliarijos paplitimui ir paplitimui grupių RCT . Taigi, nameliai pagrįsti eksperimentiniai tyrimai, kurių metu lauke surinkti insekticidais apdoroti limfmazgiai yra įtraukti į klasterio RCT, gali suteikti vertingų duomenų apie insekticidais apdorotų limfmazgių lyginamąjį biologinį veiksmingumą ir insekticidinį išlikimą per numatomą jų gyvavimo trukmę ir padėti interpretuoti šių tyrimų epidemiologinius rezultatus.
Eksperimentinis namelio testas yra standartizuotas imituotas žmonių gyvenamasis būstas, kurį rekomenduoja Pasaulio sveikatos organizacija, siekiant įvertinti insekticidais apdorotų tinklelių nuo uodų efektyvumą. Šie bandymai atkartoja realias ekspozicijos sąlygas, su kuriomis susiduria uodų šeimininkai, sąveikaudami su buitiniais lovų tinkleliais, todėl yra labai tinkamas būdas įvertinti naudojamų lovų tinklų biologinį veiksmingumą per numatomą tarnavimo laiką.
Šio tyrimo metu buvo įvertintas trijų skirtingų tipų naujos kartos insekticidinių tinklų nuo uodų (PermaNet® 3.0, Royal Guard® ir Interceptor® G2) entomologinis efektyvumas lauko sąlygomis eksperimentiniuose tvartuose ir lyginamas su standartiniu tinkleliu, kuriame yra tik piretrinas (Interceptor®). Visi šie insekticidais apdoroti tinkleliai nuo uodų yra įtraukti į PSO išankstinį sąrašą, skirtą kovoti su pernešėjais. Išsamios kiekvieno tinklo nuo uodų charakteristikos pateikiamos žemiau:
2020 m. kovo mėn. buvo vykdoma didelio masto laukuose sendintų tinklų nuo uodų platinimo kampanija pietų Benino Zou prefektūros kaimuose, skirtuose bandomiesiems bandymams nameliuose. Interceptor®, Royal Guard® ir Interceptor® G2 lovų tinklai buvo atrinkti iš atsitiktinai atrinktų grupių Kove, Zagnanado ir Ouinhi savivaldybėse kaip patvarumo stebėjimo tyrimo dalis, įdėta į klasterio RCT, siekiant įvertinti dvigubais insekticidais apdorotų tinklelių epidemiologinį veiksmingumą. PermaNet® 3.0 tinkleliai nuo uodų buvo surinkti Avokanzun kaime netoli Jija ir Bohicon miestelių (7°20′ šiaurės platumos, 1°56′ rytų ilgumos) ir išdalinti kartu su RCT klasteriniais tinklais nuo uodų per 2020 m. Nacionalinės maliarijos kontrolės programos masinę kampaniją. 1 paveiksle parodytos tyrimų grupių / kaimų, kuriuose buvo surinkti skirtingi ITN tipai, vietos, palyginti su eksperimentinėmis namelių vietomis.
Buvo atliktas bandomasis namelio bandymas, siekiant palyginti entomologinius Interceptor®, PermaNet® 3.0, Royal Guard® ir Interceptor® G2 ITN, kai jie buvo pašalinti iš namų ūkių praėjus 12, 24 ir 36 mėnesiams po platinimo. Kiekvienu metiniu laiko momentu senų ITN našumas lauke buvo lyginamas su naujais, nenaudojamais kiekvieno tipo tinklais ir neapdorotais tinklais kaip neigiama kontrolė. Kiekvienu metiniu laiko momentu iš viso 54 kartotiniai lauko senėjimo ITN mėginiai ir 6 nauji kiekvieno tipo ITN buvo išbandyti 1 arba 2 kartotiniuose nameliuose, kai gydymas buvo keičiamas kasdien. Prieš kiekvieną namelio bandymą pagal PSO rekomendacijas buvo išmatuotas kiekvieno ITN tipo senų lauko tinklų vidutinis poringumo indeksas. Siekiant imituoti nusidėvėjimą nuo kasdienio naudojimo, visi nauji ITN ir neapdoroti kontroliniai tinklai buvo perforuoti šešiomis 4 x 4 cm skylutėmis: po dvi kiekviename ilgajame šoniniame skydelyje ir po vieną kiekviename trumpame šoniniame skydelyje pagal PSO rekomendacijas. Tinklelis nuo uodų buvo įrengtas trobelės viduje, stogo lakštų kraštus surišant virvėmis prie vinelių viršutiniuose trobelės sienų kampuose. Kiekviename namelio tyrime buvo įvertinti šie gydymo būdai:
Lauke sendinti tinklai buvo įvertinti eksperimentiniuose nameliuose tais pačiais metais, kai tinklai buvo išimti. Namelių bandymai buvo atlikti toje pačioje vietoje 2021 m. gegužės–rugsėjo mėn., 2022 m. balandžio–birželio mėn. ir 2023 m. gegužės–liepos mėn. tinklai buvo pašalinti atitinkamai po 12, 24 ir 36 mėnesių. Kiekvienas tyrimas truko vieną visą gydymo ciklą (54 naktys per 9 savaites), išskyrus 12 mėnesių, kai buvo atlikti du gydymo ciklai iš eilės, siekiant padidinti uodų imties dydį. Taikant lotyniško kvadrato dizainą, gydymas buvo keičiamas kas savaitę tarp eksperimentinių namelių, kad būtų galima kontroliuoti namelio vietos poveikį, o savanoriai buvo keičiami kasdien, kad būtų galima kontroliuoti atskirų šeimininkų patrauklumo uodams skirtumus. Uodai buvo renkami 6 dienas per savaitę; 7 dieną, prieš kitą rotacijos ciklą, nameliai buvo išvalyti ir vėdinti, kad būtų išvengta užkrėtimo.
Pagrindiniai eksperimentinio gydymo namelyje nuo piretroidams atsparių Anopheles gambiae uodų veiksmingumo rodikliai ir naujos kartos ITN palyginimas su tik piretroidų turinčiu Interceptor® tinklu buvo šie:
Antrinės veiksmingumo baigtys, skirtos eksperimentiniam gydymui nuo piretroidams atsparių Anopheles gambiae uodų, buvo tokie:
Apribojimas (%) – sumažėjęs patekimo į gydomą grupę dažnis, palyginti su negydyta grupe. Skaičiavimas yra toks:
kur Tu yra uodų, įtrauktų į neapdorotą kontrolinę grupę, skaičius, o Tt yra uodų, įtrauktų į gydomą grupę, skaičius.
Nusivylimo dažnis (%) – slinkimo dažnis dėl galimo gydymo sudirginimo, išreikštas balkone surinktų uodų dalimi.
. Kraujasiurbių uodų slopinimo koeficientas (%) – tai kraujasiurbių uodų dalies sumažėjimas gydytoje grupėje, palyginti su negydyta kontroline grupe. Skaičiavimo metodas yra toks: čia Bfu yra kraujasiurbių uodų dalis negydytoje kontrolinėje grupėje, o Bft yra kraujasiurbių uodų dalis gydomoje grupėje.
Vaisingumo sumažėjimas (%) – vaisingų uodų dalies sumažėjimas gydomoje grupėje, palyginti su negydyta kontrole. Skaičiavimo metodas yra toks: čia Fu yra vaisingų uodų dalis negydytoje kontrolinėje grupėje, o Ft yra vaisingų uodų dalis gydomoje grupėje.
Siekdama stebėti Covè vektorių populiacijų atsparumo profilio pokyčius laikui bėgant, PSO tais pačiais kiekvieno eksperimentinio namelio tyrimo metais (2021 m., 2022 m., 2023 m.) atliko biologinius tyrimus in vitro ir buteliukuose, kad įvertintų tiriamųjų ITN jautrumą AI ir informuotų apie rezultatų interpretaciją. Atliekant tyrimus in vitro, uodai buvo veikiami filtravimo popieriais, apdorotais nustatytos koncentracijos alfa-cipermetrinu (0,05 %) ir deltametrinu (0,05 %), ir buteliais, padengtais nustatytos koncentracijos CFP (100 μg/buteliuke) ir PPF (100 μg/buteliuke), kad būtų įvertintas jautrumas šiems preparatams. Atsparumo piretroidams intensyvumas buvo tiriamas veikiant uodus 5 kartus (0,25%) ir 10 kartų (0,50%) skirtinga α-cipermetrino ir deltametrino koncentracija. Galiausiai, PBO sinergijos ir citochromo P450 monooksigenazės (P450) per didelės raiškos indėlis į atsparumą piretroidams buvo įvertintas iš anksto veikiant uodus skirtingoms α-cipermetrino (0,05 %) ir deltametrino (0,05 %) koncentracijoms ir prieš PBO (4 %). Filtravimo popierius, naudojamas PSO mėgintuvėlio tyrimui, buvo įsigytas iš Universiti Sains Malaysia. PSO biologinio tyrimo buteliukai naudojant CFP ir PPF buvo paruošti pagal PSO rekomendacijas.
Biologiniams tyrimams naudojami uodai buvo surinkti lervų stadijoje iš veisimosi vietų, esančių netoli eksperimentinių namelių, o paskui auginami suaugusiems. Kiekvienu laiko momentu mažiausiai 100 uodų buvo veikiami kiekvienu būdu 60 minučių, 4 pakartojimai kiekviename mėgintuvėlyje / buteliuke ir maždaug 25 uodai kiekviename mėgintuvėlyje / buteliuke. Piretroidų ir CFP ekspozicijai buvo naudojami 3–5 dienų amžiaus nemaitinti uodai, o PPF – 5–7 dienų amžiaus kraujasiurbiai uodai, skatinantys oogenezę ir įvertinti PPF poveikį uodų dauginimuisi. Lygiagretus poveikis buvo atliktas naudojant silikoniniu aliejumi impregnuotą filtravimo popierių, švarų PBO (4%) ir acetonu padengtus butelius kaip kontrolę. Ekspozicijos pabaigoje uodai buvo perkelti į neapdorotus konteinerius ir paveikti vata, suvilgyta 10% (m/v) gliukozės tirpale. Mirtingumas buvo užregistruotas praėjus 24 valandoms po piretroidų poveikio ir kas 24 valandas 72 valandas po CFP ir PPF poveikio. Norint įvertinti jautrumą PPF, išgyvenę PPF paveikti uodai ir atitinkamos neigiamos kontrolės buvo išpjaustytos po to, kai buvo užfiksuotas uždelstas mirtingumas, kiaušidžių vystymasis stebimas naudojant sudėtinį mikroskopą, o vaisingumas buvo įvertintas pagal Christophers kiaušinėlių vystymosi stadiją [28, 30]. Jei kiaušinėliai visiškai išsivystė iki Christophers V stadijos, uodai buvo klasifikuojami kaip vaisingi, o jei kiaušinėliai nebuvo visiškai išsivystę ir liko I–IV stadijose, uodai buvo klasifikuojami kaip sterilūs.
Kiekvienu metų laiku iš naujų ir lauke sendintų tinklų PSO rekomendacijose nurodytose vietose buvo išpjauti 30 × 30 cm gabaliukai [22]. Po pjovimo tinklai buvo pažymėti etiketėmis, suvynioti į aliuminio foliją ir laikyti šaldytuve 4 ± 2 ° C temperatūroje, kad būtų išvengta AI migracijos į audinį. Tada tinklai buvo išsiųsti į Valonijos žemės ūkio tyrimų centrą Belgijoje, kad būtų atlikta cheminė analizė, siekiant išmatuoti viso AI kiekio pokyčius per jų tarnavimo laiką. Naudoti analizės metodai (remiantis Tarptautinio pesticidų analizės kooperatyvo komiteto rekomenduojamais metodais) buvo aprašyti anksčiau [25, 31].
Eksperimentinio namelio bandymo duomenims bendras gyvų / negyvų, kandžiojančių / nekandančių ir vaisingų / sterilių uodų skaičius skirtinguose namelių skyriuose buvo sumuojamas kiekvieno gydymo metu kiekviename bandyme, siekiant apskaičiuoti įvairius proporcingus rezultatus (72 valandų mirtingumas, įkandimas, ektoparazitizmas, grynasis įstrigimas) ir jų pasikliovimo intervalas 5 %). Šių proporcingų dvejetainių rezultatų gydymo skirtumai buvo analizuojami naudojant logistinę regresiją, o skaičiavimo rezultatų skirtumai buvo analizuojami naudojant neigiamą dvejetainę regresiją. Kadangi du gydymo kaitos ciklai buvo atliekami kas 12 mėnesių, o kai kurie gydymo būdai buvo išbandyti atliekant tyrimus, uodų įsiskverbimo analizė buvo pakoreguota pagal kiekvieno gydymo išbandymo dienų skaičių. Taip pat buvo analizuojamas naujas kiekvieno rezultato ITN, kad būtų gautas vienas visų laiko taškų įvertinimas. Be pagrindinio aiškinamojo gydymo kintamojo, kiekviename modelyje buvo įtrauktas namelis, miegamasis, bandomasis laikotarpis, ITN diafragmos indeksas ir diena kaip fiksuoti efektai, skirti kontroliuoti skirtumus dėl atskirų miegamųjų ir namelių patrauklumo skirtumų, sezoniškumo, tinklelio nuo uodų būklės ir per didelio sklaidos. Regresinės analizės metu buvo nustatyti pakoreguoti šansų koeficientai (OR) ir atitinkami 95 % pasikliautinieji intervalai, siekiant įvertinti naujos kartos ITN, palyginti su tik piretroidų tinklu Interceptor®, poveikį pirminiams uodų mirtingumo ir vaisingumo rezultatams. Modelių P vertės taip pat buvo naudojamos norint priskirti kompaktiškas raides, rodančias statistinį reikšmingumą 5% lygiu visiems pirminių ir antrinių rezultatų palyginimams poromis. Visos regresinės analizės buvo atliktos Stata 18 versijoje.
Covese vektorių populiacijų jautrumas buvo aiškinamas remiantis mirtingumu ir vaisingumu, stebėtu in vitro ir buteliuko biologiniais tyrimais pagal Pasaulio sveikatos organizacijos rekomendacijas. Cheminės analizės rezultatai parodė bendrą AI kiekį ITN fragmentuose, kuris buvo naudojamas apskaičiuoti AI sulaikymo koeficientą lauke senuose tinkluose, palyginti su naujais tinklais kiekvienu laiko momentu kiekvienais metais. Visi duomenys buvo rankiniu būdu įrašyti į standartines formas ir du kartus įvesti į Microsoft Excel duomenų bazę.
Benino sveikatos ministerijos (Nr. 6/30/MS/DC/DRFMT/CNERS/SA), Londono higienos ir atogrąžų medicinos mokyklos (LSHTM) (Nr. 16237) ir Pasaulio sveikatos organizacijos (Nr. ERC.0003153) etikos komitetai patvirtino bandomojo namelio bandymą, kuriame dalyvavo savanoriai. Prieš dalyvaujant tyrime iš visų savanorių buvo gautas rašytinis informuotas sutikimas. Visi savanoriai gavo nemokamą chemoprofilaktiką, kad sumažintų maliarijos riziką, o viso tyrimo metu budėjo slaugytoja, kuri įvertino kiekvieną savanorią, kuriam pasireiškė karščiavimo simptomai arba pasireiškė nepageidaujama reakcija į tiriamąjį produktą.
Visi eksperimentinių namelių rezultatai, apibendrinant kiekvienos eksperimentinės grupės gyvų / mirusių, badaujančių / krauju maitinamų ir vaisingų / sterilių uodų skaičių, taip pat aprašomoji statistika pateikiami kaip papildoma medžiaga (S1 lentelė).
Eksperimentinėje trobelėje Kovoje, Benine, buvo slopinamas laukinių piretroidams atsparių Anopheles gambiae uodų maitinimas krauju. Duomenys iš neapdorotų kontrolinių grupių ir naujų tinklų buvo sujungti per bandymus, kad būtų galima įvertinti vieną veiksmingumą. Logistinės regresijos analizės duomenimis, stulpeliai su bendromis raidėmis reikšmingai nesiskyrė 5% lygyje (p > 0,05). Klaidų juostos rodo 95 % pasikliovimo intervalus.
Laukinių piretroidams atsparių Anopheles gambiae uodų, patenkančių į eksperimentinę trobelę Kovoje, Benine, mirtingumas. Duomenys iš neapdorotų kontrolinių grupių ir naujų tinklų buvo sujungti atliekant tyrimus, kad būtų galima įvertinti vieną veiksmingumą. Logistinės regresijos analizės duomenimis, stulpeliai su bendromis raidėmis reikšmingai nesiskyrė 5% lygyje (p > 0,05). Klaidų juostos rodo 95 % pasikliovimo intervalus.
Šansų santykis apibūdina mirtingumo skirtumą naudojant naujos kartos tinklelius nuo uodų, palyginti su tik piretroidiniais tinklais. Taškinė linija reiškia šansų santykį 1, o tai rodo, kad mirtingumas nesiskiria. Šansų koeficientas > 1 rodo didesnį mirtingumą naudojant naujos kartos tinklelius nuo uodų. Duomenys apie naujos kartos tinklelius nuo uodų buvo sujungti atliekant bandymus, kad būtų gautas vienas efektyvumo įvertinimas. Klaidų juostos rodo 95 % pasikliovimo intervalus.
Nors Interceptor® mirtingumas buvo mažiausias iš visų tirtų ITN, lauko senėjimas neturėjo neigiamos įtakos mirtingumui pernešėjų. Tiesą sakant, naujasis Interceptor® lėmė 12% mirtingumą, o lauke sendinti tinklai šiek tiek pagerėjo po 12 mėnesių (17%, p = 0,006) ir 24 mėnesius (17%, p = 0,004), o po 36 mėnesių grįžo į panašų lygį kaip naujieji tinklai (11%, p = 0,05). Priešingai, naujos kartos insekticidais apdorotų tinklų mirtingumas laikui bėgant po jų panaudojimo palaipsniui mažėjo. Sumažėjimas ryškiausias buvo naudojant Interceptor® G2, kur mirtingumas sumažėjo nuo 58 % su naujais tinkleliais iki 36 % po 12 mėnesių (p.< 0,001), 31 % po 24 mėnesių (p< 0,001), o po 36 mėnesių – 20 % (p< 0,001). Dėl naujojo PermaNet® 3.0 mirtingumas sumažėjo iki 37%, o per 12 mėnesių jis taip pat žymiai sumažėjo iki 20% (p< 0,001), 16 % po 24 mėnesių (p< 0,001), o po 36 mėnesių – 18 % (p< 0,001). Panaši tendencija buvo pastebėta naudojant Royal Guard® – naujas tinklelis sumažino mirtingumą 33 %, o po 12 mėnesių gerokai sumažėjo iki 21 % (p.< 0,001), 17 % po 24 mėnesių (p< 0,001) ir 15 % po 36 mėnesių (p< 0,001).
Laukinių piretroidams atsparių Anopheles gambiae uodų, patenkančių į eksperimentinę trobelę Kwa, Benine, vaisingumo sumažėjimas. Duomenys iš neapdorotų kontrolinių grupių ir naujų tinklų buvo sujungti atliekant tyrimus, kad būtų galima įvertinti vieną veiksmingumą. Stulpeliai su bendromis raidėmis reikšmingai nesiskyrė 5% lygyje (p > 0,05), atlikus logistinės regresijos analizę. Klaidų juostos rodo 95 % pasikliovimo intervalus.
Šansų koeficientai apibūdina vaisingumo skirtumą naudojant naujos kartos tinklelius nuo uodų, palyginti su tik piretroidiniais tinkleliais nuo uodų. Taškinė linija reiškia santykį 1, o tai rodo, kad vaisingumas nesiskiria. Šansų koeficientai< 1 rodo didesnį vaisingumo sumažėjimą naudojant naujos kartos tinklus. Duomenys apie naujos kartos tinklelius nuo uodų buvo sujungti atliekant bandymus, kad būtų gautas vienas efektyvumo įvertinimas. Klaidų juostos rodo 95 % pasikliovimo intervalus.
Paskelbimo laikas: 2025-02-17