Augalinės ir patogeninės medžiagos
Sorgo asociacijos kartografavimo populiaciją, žinomą kaip sorgo konversijos populiacija (SCP), pateikė dr. Pat Brown iš Ilinojaus universiteto (dabar UC Davis).Jis buvo aprašytas anksčiau ir yra įvairių linijų rinkinys, konvertuotas į nejautrumą fotoperiodui ir mažesnį ūgį, kad palengvintų augalų augimą ir vystymąsi JAV aplinkoje.Šiame tyrime buvo panaudota 510 šios populiacijos linijų, nors dėl blogo daigumo ir kitų kokybės kontrolės problemų ne visos linijos buvo naudojamos analizuojant visus tris požymius.Galiausiai chitino atsako analizei buvo panaudoti 345 eilučių duomenys, flg22 atsako – 472 eilučių, o TLS atsparumo – 456 eilučių.B. cookeiLSLP18 padermė buvo gauta iš Dr. Burt Bluhm iš Arkanzaso universiteto.
MAMP atsako matavimas
Šiame tyrime buvo naudojami du skirtingi MAMP flg22 (genscript katalogas Nr. RP19986) ir chitinas.Sorgo augalai buvo auginami intarpuose, išdėstytuose šiltnamyje ant žemėmis užpildytų plokščių (33 % Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix).Augalai buvo laistomi dieną prieš mėginių paėmimą, kad būtų išvengta papildomos lapų drėgmės paėmimo dieną.
Linijos buvo suskirstytos atsitiktinai ir logistikos sumetimais sodinamos partijomis po 60 linijų.Kiekvienai linijai buvo pasodinti trys „vazonai“ su dviem sėklomis vienoje eilutėje.Tolesnės partijos buvo pasodintos, kai tik buvo apdorota ankstesnė partija, kol buvo įvertinta visa populiacija.Abiejuose MAMP buvo atlikti du eksperimentiniai bandymai, kurių genotipai buvo pakartotinai atsitiktiniai kiekviename iš dviejų važiavimų.
ROS tyrimai buvo atlikti, kaip aprašyta anksčiau.Trumpai tariant, kiekvienai linijai į 3 skirtingus vazonus buvo pasodintos šešios sėklos.Iš gautų sodinukų buvo atrinkti trys pagal vienodumą.Daigai, kurie atrodė neįprastai arba buvo žymiai aukštesni ar žemesni nei dauguma, nebuvo naudojami.Iš trijų skirtingų 15 dienų sorgo augalų 4-ojo lapo plačiausios dalies buvo iškirpti keturi 3 mm skersmens lapų diskai.Vienas diskas vienam lapui iš dviejų augalų ir du diskai iš vieno augalo, o antrasis diskas tampa vandens kontrole (žr. toliau).Diskai buvo atskirai plukdyti ant 50 µl H20 juodoje 96 šulinėlių plokštelėje, užsandarinti aliuminio sandarikliu, kad būtų išvengta šviesos poveikio, ir laikyti kambario temperatūroje per naktį.Kitą rytą reakcijos tirpalas buvo pagamintas naudojant 2 mg/ml chemiliuminescencinį zondą L-012 (Wako, katalogo Nr. 120-04891), 2 mg/ml krienų peroksidazę (tipas VI-A, Sigma-Aldrich, katalogo Nr. P6782) ir 100 mg/ml chitino arba 2 μM Flg22.50 µl šio reakcijos tirpalo buvo įpilta į tris iš keturių šulinėlių.Ketvirtasis šulinys buvo netikras kontrolė, į kurį buvo pridėtas reakcijos tirpalas, išskyrus MAMP.Kiekvienoje plokštelėje taip pat buvo keturi tušti šuliniai, kuriuose buvo tik vanduo.
Įpylus reakcijos tirpalo, liuminescencija buvo matuojama naudojant SynergyTM 2 daugiafunkcinį mikroplokštelių skaitytuvą (BioTek) kas 2 min. 1 val.Plokštelių skaitytuvas atlieka liuminescencijos matavimus kas 2 minutes per šią 1 valandą.Visų 31 rodmenų suma buvo apskaičiuota, kad būtų gauta kiekvieno šulinio vertė.Apskaičiuota kiekvieno genotipo MAMP atsako vertė buvo apskaičiuota kaip (trijų eksperimentinių šulinėlių vidutinė liuminescencijos vertė – imitacinė šulinio vertė) – atėmus vidutinę tuščio šulinėlio vertę.Tuščiųjų šulinių vertės nuolat buvo artimos nuliui.
Lapų diskaiNicotiana benthamiana, viena labai jautri sorgo linija (SC0003) ir viena mažai jautri sorgo linija (PI 6069) taip pat buvo įtraukta kaip kontrolinė medžiaga kiekvienoje 96 šulinėlių plokštelėje kokybės kontrolės tikslais.
B. cookeiinokuliato paruošimas ir inokuliacija
B. cookeiinokuliatas buvo paruoštas, kaip aprašyta anksčiau.Trumpai tariant, sorgo grūdai buvo mirkomi vandenyje tris dienas, nuplaunami, supilami į 1 l kūgines kolbas ir valandą laikomi autoklave 15 psi ir 121 ° C temperatūroje.Tada grūdai buvo pasėti maždaug 5 ml maceruotų grybų iš šviežios kultūrosB. cookeiLSLP18 išskiriamas ir paliekamas 2 savaites kambario temperatūroje, kas 3 dienas purtant kolbas.Po 2 savaičių grybeliu užkrėsti sorgo grūdai buvo džiovinami ore ir laikomi 4 ° C temperatūroje iki lauko inokuliacijos.Viso bandymo metu buvo naudojamas tas pats inokuliatas ir kasmet gaminamas šviežias.Inokuliacijai į 4-5 savaičių amžiaus sorgo augalų sruogą buvo dedama 6–10 užkrėstų grūdų.Iš šių grybų susidariusios sporos per savaitę užkrėtė jaunus sorgo augalus.
Sėklų paruošimas
Prieš sodinant į lauką sorgo sėklos buvo apdorotos fungicido, insekticido ir apsauginės medžiagos mišiniu, kuriame buvo ~ 1% Spirato 480 FS fungicido, 4% Sebring 480 FS fungicido, 3% Sorpro 940 ES sėklų apsauginės medžiagos.Tada sėklos buvo džiovinamos ore 3 dienas, todėl aplink sėklas buvo plona šio mišinio danga.Apsauginė medžiaga leido naudoti herbicidą Dual Magnum kaip gydymą prieš atsiradimą.
Atsparumo tikslinėms dėmėms įvertinimas
SCP buvo pasodintas 2017 m. birželio 14–15 d. ir 2018 m. birželio 20 d. Centrinėje pasėlių tyrimų stotyje Kleitone, NC.Eksperimentai buvo pasodinti 1,8 m vienaeiliais, 0,9 m eilės pločio, naudojant 10 sėklų vienam sklype.Kiekvieno eksperimento periferijoje buvo pasodintos dvi kraštinės eilės, kad būtų išvengta krašto poveikio.Eksperimentai buvo inokuliuoti 2017 m. liepos 20 d. ir 2018 m. liepos 20 d., tuo metu sorgo augalai buvo 3 augimo stadijoje. Vertinami nuo vieno iki devynių skalių, kai augalai, neturintys ligos požymių, buvo įvertinti kaip devyni ir visiškai. žuvę augalai buvo įvertinti kaip vienas.2017 m. buvo atlikti du įvertinimai, o 2018 m. – keturi rodmenys, pradedant kiekvienais metais praėjus dviem savaitėms po inokuliacijos.sAUDPC (standartizuotas plotas po ligos progresavimo kreive) buvo apskaičiuotas, kaip aprašyta anksčiau.
Paskelbimo laikas: 2021-01-01